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性?xún)r(jià)比超高細(xì)胞檢測(cè)增殖產(chǎn)品CCK8,Cell Counting Kit-8(CCK-8)細(xì)胞增殖試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào):C6005XL
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  • Cell Counting Kit-8(CCK-8)細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒

    產(chǎn)品貨號(hào): C6005S/C6005M/C6005L/C6005XL/C6005XXL

    產(chǎn)品規(guī)格: 100T/500T/3000T/10000T/5×10000T

    目錄價(jià)(元):300/700/2560/7000/25000

    可替代市場(chǎng)同類(lèi)產(chǎn)品

    產(chǎn)品概述:

儲(chǔ)存條件
4℃避光保存,長(zhǎng)期儲(chǔ)存置于-20℃,有效期見(jiàn)外包裝。

產(chǎn)品介紹
Cell Counting Kit-8 簡(jiǎn)稱(chēng) CCK8(或 WST-8)試劑盒,是一種基于 WST-8(化學(xué)名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4- 硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)顯色反應(yīng)的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測(cè)試劑盒。
WST-8 工作原理:在電子耦合試劑存在的條件下,可以被線(xiàn)粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產(chǎn)物(formazan)。顏色的深淺與細(xì)胞的增殖成正比,與細(xì)胞毒性成反比。使用酶標(biāo)儀在 450 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定 OD 值,間接反映活細(xì)胞數(shù)量。
WST-8 是 MTT 的一種升級(jí)替代產(chǎn)品,和 MTT 或其它 MTT 類(lèi)似產(chǎn)品如 XTT、MTS 等相比有明顯的優(yōu)點(diǎn)。首先,MTT 被線(xiàn)粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成的甲臜不是水溶性的,需要有特定的溶解液來(lái)溶解;而 WST-8、XTT 和 MTS 產(chǎn)生的甲臜都是水溶性的,可以省去后續(xù)的溶解步驟。其次,WST-8 產(chǎn)生的甲臜比 XTT 和 MTS 產(chǎn)生的甲臜更易溶解。再次,WST-8 比 XTT 和 MTS 更加穩(wěn)定,使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加穩(wěn)定。另外,WST-8 與 MTT、XTT 相比線(xiàn)性范圍更寬,靈敏度更高。
CCK 法廣泛應(yīng)用于藥物篩選、細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定、腫瘤藥敏試驗(yàn)以及生物因子的活性檢測(cè)等方面。


說(shuō)明書(shū):

 UE-C6005S/C6005M/C6005L/C6005XL/C6005XXL    


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常見(jiàn)問(wèn)題解答:

為什么測(cè)的吸光度值過(guò)低?

1.細(xì)胞數(shù)量過(guò)低,建議增加細(xì)胞待測(cè)數(shù)量;
2.染色難度大,建議增加CCK-8孵育時(shí)間

數(shù)據(jù)重復(fù)性差?
1.孔板最外圈試劑容易揮發(fā),建議最外一圈的孔只加培養(yǎng)基,不作為測(cè)定孔用;
2.CCK-8沾壁,建議加入CCK-8后,輕輕敲擊培養(yǎng)板以幫助混勻;
3.細(xì)胞數(shù)量過(guò)多或過(guò)少,建議預(yù)先在1000-100000個(gè)/孔范圍內(nèi)摸索條件;
4.孔內(nèi)氣泡干擾酶標(biāo)儀檢測(cè),檢測(cè)前需確保每個(gè)孔內(nèi)無(wú)氣泡

在做細(xì)胞的加藥實(shí)驗(yàn)時(shí),藥物對(duì)CCK-8測(cè)定是否有影響?
1.注意如果藥物具有還原性(如維生素C),會(huì)和CCK-8發(fā)生顯色反應(yīng),增加吸光度;
2.藥物中的金屬對(duì)CCK-8顯色有影響:當(dāng)終濃度為1mM的氯化亞鉛、氧化鐵、硫酸銅會(huì)抑制5%,15%, 90%的顯色反應(yīng),使靈敏度降級(jí)。如果終濃度是10mM的話(huà),將會(huì)100%抑制。解決辦法:首先要確認(rèn)藥物是否有吸收,在含有藥物的培養(yǎng)基中加入CCK-8,測(cè)定450nm的吸光度,如果它的吸光度比不含藥物的培養(yǎng)基(加CCK-8)的吸光度高,則證明藥物有影響,可在加CCK-8之前更換培養(yǎng)基,去掉藥物的影響;
3.由于培養(yǎng)基中可能含有氧化還原反應(yīng)的物質(zhì),在正式實(shí)驗(yàn)之前,建議使用一個(gè)孔作一下檢測(cè),有必要先確認(rèn)培養(yǎng)基和CCK-8是否反應(yīng),一般正常的OD值應(yīng)該在0.4以下

可否采用CCK-8法進(jìn)行藥物的IC50檢測(cè)?
可以,將細(xì)胞培養(yǎng)后按照不同濃度的藥物處理一定時(shí)間后進(jìn)行CCK-8檢測(cè),根據(jù)吸光度繪制曲線(xiàn),計(jì)算該藥物抑制細(xì)胞數(shù)量一半時(shí)的濃度(IC50)

CCK-8對(duì)于不同的細(xì)胞,靈敏度是否一樣?
不一樣,懸浮細(xì)胞較貼壁細(xì)胞難染色。對(duì)于貼壁細(xì)胞,一般加入CCK-8培養(yǎng)1-4小時(shí)吸光度已經(jīng)很高,但對(duì)于懸浮細(xì)胞則可能吸光度較低,可以通過(guò)延長(zhǎng)CCK-8的加入時(shí)間或增加細(xì)胞數(shù)量來(lái)解決

若是暫不檢測(cè)OD值,該如何處理?
若暫時(shí)不測(cè)定 OD 值,可以向每孔中加入 10μL 0.1 M 的 HCl 溶液或者 1% w/v SDS 溶液,并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24 小時(shí)內(nèi)測(cè)定,吸光度不會(huì)發(fā)生變化

用CCK-8測(cè)細(xì)胞活力時(shí)每次都要做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)嗎?
建議每次做,雖然細(xì)胞是一樣的,但是細(xì)胞的狀態(tài)不一定一樣。對(duì)于狀態(tài)不一樣的細(xì)胞,建議每次做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)


引用及參考文獻(xiàn):
 

1.Oncogene miR-187-5p is associated with cellular proliferation, migration,invasion, apoptosis and an increased risk of recurrence in bladder cancer
ZuweiLi ,CanbinLin,LiwenZhao,LiangZhou,XiangPan,JingQuan,XiqiPeng,WeiqingLi,HangLi,JinlingXu,WeijieXu,XinGuan,YunChen
Biomedicine & Pharmacotherapy(2018)
應(yīng)用方向:細(xì)胞活性檢測(cè):膀胱癌細(xì)胞(BC) 

2.MicroRNA?572 functions as an oncogene and a potential biomarker for renal cell carcinoma prognosis

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參考文獻(xiàn)1:www.baidu.com

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